@PHDTHESIS{ 2024:916723193, title = {Uso da tecnologia CRISPR/Cas9 na edição de genes e validação de vetores para tolerância a estresses bióticos em bananeira (Musa spp.)}, year = {2024}, url = "http://tede2.uefs.br:8080/handle/tede/1895", abstract = "As diversas doenças causadas por fungos, oomicetos, bactérias e patógenos virais, comprometem o desenvolvimento das plantas afetando sua produtividade final. Para superar esses desafios, os programas de melhoramento buscam métodos e técnicas para aprimorar o desempenho das culturas em cenários de estresses. A edição gênica, via CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats), surge como uma ferramenta versátil com potencial para desenvolver culturas tolerantes aos múltiplos estresses. O primeiro capítulo deste trabalho objetivou desenvolver uma revisão sistemática da literatura gerada nos últimos doze anos sobre o uso da tecnologia CRISPR na edição de genes para tolerância a estresses bióticos. Buscou-se avaliar artigos depositados em diferentes bases eletrônicas, usando strings de busca e critérios de inclusão e exclusão predefinidos. Esta revisão demonstrou que o sistema CRISPR/Cas é aplicado em diversas espécies vegetais a fim de promover tolerância aos principais estresses bióticos. A maioria dos estudos foram desenvolvidos no continente Asiático, especificamente na China. A enzima Cas9 é usada na maioria dos artigos, mas enzimas como Cas12 (Cpf1) e Cas13 também podem ser usadas como uma ferramenta adicional para edição de genomas. A revisão também revelou vários genes editados por CRISPR e que as respostas das plantas aos fatores de estresse são mediadas por muitas vias de sinalização complexas. Além disso, a qualidade dos artigos inseridos nesta revisão foi atestada por meio de uma análise de risco de viés. No segundo capítulo, foram desenvolvidos duas construções/cassetes como produtos biotecnológicos contendo ou não promotor tecido-específico de raiz de bananeira, além de utilizar a tecnologia CRISPR/Cas9 para o knockout do gene PDS (Fitoeno desaturase) na cultivar Prata-Anã. Para isso, dois RNAs guias (gRNA) foram desenhados e dois vetores/construções foram confeccionados, suas partes foram isoladas, purificadas e transformadas em Agrobacterium tumefaciens. Células embriogênicas de bananeira Prata-anã foram utilizadas como explantes para transformação via A. tumefaciens. A partir desses métodos foi possível desenvolver um protocolo para construção e validação de vetores CRISPR/Cas para knockout de genes.", publisher = {Universidade Estadual de Feira de Santana}, scholl = {Doutorado Acadêmico em Biotecnologia}, note = {DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA} }