@PHDTHESIS{ 2025:1687839682,
 	title = {Produção e caracterização bioquímica de uma endoglucanase recombinante de Moniliophthora perniciosa (STAHEL) Aime & Phillips-Mora a partir de células de Escherichia coli},
 	year = {2025},
 	url = "http://tede2.uefs.br:8080/handle/tede/1901",
 	abstract = "As celulases são enzimas hidrolíticas fundamentais para a conversão da biomassa
 lignocelulósica em açúcares fermentáveis, atuando na clivagem das ligações β-1,4-
 glicosídicas da celulose, componente estrutural predominante da parede celular
 vegetal. Produzidas naturalmente por diversos microrganismos, os fungos
 filamentosos destacam-se como os principais produtores, em virtude de sua alta
 eficiência enzimática e secreção extracelular. Entre esses, Moniliophthora perniciosa,
 um basidiomiceto patogênico causador da vassoura-de-bruxa no cacaueiro
 (Theobroma cacao L.), secreta celulases termoestáveis como parte de sua estratégia
 infecciosa, sendo uma fonte ainda inexplorada para aplicações biotecnológicas. Este
 estudo teve como objetivo, além de revisar os avanços recentes na produção
 recombinante de celulases fúngicas, descrever pela primeira vez a produção,
 purificação e caracterização funcional da endoglucanase EG45 de M. perniciosa,
 expressa heterologamente em Escherichia coli. A revisão de literatura evidenciou que
 diversos estudos relatam a expressão bem-sucedida de genes celulolíticos de fungos
 filamentosos em sistemas heterólogos, especialmente em E. coli, devido à sua fácil
 manipulação genética, rápido crescimento, elevada densidade celular e ampla
 disponibilidade de vetores de expressão. Essas tecnologias têm viabilizado a
 produção em larga escala de coquetéis enzimáticos otimizados, com ganhos
 significativos em rendimento, estabilidade e redução de custos, sobretudo para
 aplicações em biorrefinarias. Na parte experimental, o gene EG45, com códons
 otimizados, foi clonado nos vetores pET28a e pET32a, sendo obtida expressão
 eficiente com o vetor pET32a na cepa E. coli Rosetta (DE3), induzida com IPTG (1
 mM) a 37 °C por 4 horas. Uma banda de aproximadamente 38 kDa, compatível com
 o peso molecular previsto, foi detectada por SDS-PAGE em ambas as frações solúvel
 e insolúvel. A purificação da fração insolúvel com solubilização em ureia e refolding
 resultou em alta pureza, mas com concentração insuficiente para testes de atividade
 enzimática. Em contrapartida, a proteína obtida da fração solúvel apresentou
 rendimento satisfatório e permitiu os ensaios funcionais, revelando atividade ótima a
 50 °C e pH 6,0. Conclui-se que a produção recombinante da endoglucanase EG45 de
 Moniliophthora perniciosa, aqui descrita pela primeira vez, representa um avanço
 importante tanto para a compreensão da biologia desse fitopatógeno quanto para seu
 potencial uso industrial. A demonstração da atividade funcional da enzima reforça a
 viabilidade da expressão heteróloga em E. coli como hospedeiro eficiente para a
 produção de enzimas fúngicas ativas, com aplicações promissoras na valorização de
 resíduos agroindustriais e no desenvolvimento de tecnologias sustentáveis para a
 produção de biocombustíveis.",
 	publisher = {Universidade Estadual de Feira de Santana},
 	scholl = {Doutorado Acadêmico em Biotecnologia},
 	note = {DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA}
}