@PHDTHESIS{ 2025:297398457,
 	title = {Caracterização estrutural in silico e produção recombinante de uma lignina peroxidase de Trametes villosa},
 	year = {2025},
 	url = "http://tede2.uefs.br:8080/handle/tede/1974",
 	abstract = "A lignina peroxidase (LiP) (EC 1.11.1.14) é uma enzima produzida por fungos de decomposição branca, e de grande interesse biotecnológico devido a sua capacidade de degradar lignina e seu potencial uso em aplicações industriais e ambientais, especialmente na produção de biocombustível. Apesar de
 numerosos estudos com extrato fungico de LiP, a produção ainda enfrenta desafios como baixo rendimento, instabilidade e dificuldade de purificação. Entre as alternativas que pode ser explorada para superar essas limitações é a produção recombinante em Escherichia coli. Diante desse cenário o objetivo desse trabalho foi selecionar, caracterizar in silico e produzir de forma recombinante, em E. coli, uma sequência consenso de lignina peroxidase do genoma do fungo Trametes villosa, para aplicação futura na produção de
 bioetanol. Os resultados obtidos demostraram que foi possível a seleção de uma sequência consenso de LiP do genoma de T. villosa (LiP1820), o modelo gerado a partir da sequência apresentou alta confiabilidade. Nos estudos de dinâmica molecular os dados de RMSD, ΔRMSF e RG apontam maior flexibilidade, melhor conformação e compactação em pH 3, indicando possível facilitador para a entrada do substrato. O rSurf apresentou uma maior superfície de contato em pH 3 o que favorece uma conformação mais ajustada, no entanto quando avaliamos o MM-PBSA e o FEL, observamos que em pH neutro a proteína se apresenta mais estável, indicando que essa alta estabilidade pode esta associada a alta rigidez em pH neutro dificultando
 o acesso ao substrato o que não é observado em pH ácido. A enzima LiP1820 de T. villosa foi expressa em E. coli com vetores pET28a e pET32a e cepas BL21 (DE3) pLySs e Rosetta™ (DE3). Apenas a construção pET32a em Rosetta™ (DE3), cultivada em meio TB, resultou em enzima ativa após refolding, com atividade máxima em pH e temperatura de 4,0 e 6,0 a 50 °C. Diante desse cenário de obtenção dessa enzima na forma ativa e seu valor biotecnologico, os avanços na produção recombinante abre caminhos para aplicação industrial, tornando sua produção viável e estratégica para o desenvolvimento de tecnologias limpas, sendo este o primeiro relato de produção recombinante de LiP de T. villosa em E. coli.",
 	publisher = {Universidade Estadual de Feira de Santana},
 	scholl = {Doutorado Acadêmico em Biotecnologia},
 	note = {DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA}
}