@MASTERSTHESIS{ 2018:279979480, title = {Caracteriza??o molecular e estrutural de quitinases de Moniliophthora perniciosa (Stahel) Aime & Phillips-Mora}, year = {2018}, url = "http://tede2.uefs.br:8080/handle/tede/856", abstract = "A quitina ? considerada o segundo biopol?mero mais importante da natureza. O ac?mulo natural no meio ambiente ? incompat?vel com sua produ??o ininterrupta, o que demonstra que existem mecanismos naturais respons?veis por sua degrada??o. As enzimas quitinol?ticas encontradas em quase todos os tipos de seres vivos s?o alvo de grande interesse na biotecnologia porque permitem a degrada??o da quitina em derivados ?teis para v?rios setores produtivos da economia, em destaque as de origem f?ngica. Diante desse panorama, a caracteriza??o molecular a partir de extra??o de RNA e amplifica??o do cDNA e a an?lise de estruturas 3D por modelagem comparativa de sequ?ncias de quitinases obtidas do genoma de Moniliophthora perciniosa (STAHEL) AIME & PHILLIPS-MORA foram direcionadas para este estudo. O fungo cultivado em meio WY durante 8-10 dias cresceu vigorosamente em condi??es em que o farelo de trigo estava bem triturado. Como a express?o da quitinase ? crucial para o crescimento do fungo, esse meio foi considerado satisfat?rio para a extra??o de RNA. O m?todo tradicional de Trizol foi mais favor?vel do que o uso de kits para extra??o de RNA. Para a detec??o de express?o de quitinases de M. perniciosa a partir de amplifica??o de cDNA, encontramos fragmentos relacionados ? regi?o de amplifica??o espec?fica determinada por sequ?ncias do genoma (16426) e usando o par de primers Chit_TEIX_F / Chit_TEIX_R. A partir de 14 sequencias de quitinases obtidas do genoma, todas apresentaram dom?nio catal?tico detectado, uma das quais apresentou 49,48 % de identidade com o molde (3G6M). Uma an?lise estat?stica utilizando o gr?fico RAMACHANDRAN mostrou que a sequ?ncia do melhor modelo gerado (997) possui 97,2% de res?duos em regi?es favor?veis. Em 5 modelos foi poss?vel identificar o s?tio ativo, sua posi??o e os res?duos envolvidos na cat?lise. Os 5 modelos constru?dos a partir do alinhamento das sequ?ncias 15210, 1679, 4357, 5707 e 997 com seus respectivos moldes pelo MODELLER apresentaram uma estrutura cl?ssica de barril alfa-beta contendo ?-h?lices e folhas-?. Ap?s alinhamento sequencial, refinamento e Din?mica Molecular, o modelo final (997) analisado pelo SWISS MODEL apresentou alta similaridade estrutural com seu respectivo molde. A partir dos modelos 3D das quitinases e o fragmento espec?fico amplificado por PCR, o uso de primers espec?ficos para os modelos gerados sequenciamento e clonagem s?o objetivos para trabalhos posteriores.", publisher = {Universidade Estadual de Feira de Santana}, scholl = {Mestrado Acad?mico em Biotecnologia}, note = {DEPARTAMENTO DE CI?NCIAS BIOL?GICAS} }